蛋白纯化的方法

蛋白纯化技术有哪些？蛋白纯化技术基本的原理是什么？今天在这里以Abbkine的预装柱、亲和层析填料为例做一个简单的介绍：

操作方法

（01）根据蛋白的特性，一般可以有以下5种纯化方法。目前平台配备的主要是前四种层析纯化的各种凝胶柱。反相层析技术在一般的蛋白纯化中较少使用，下面将详细介绍常用的前四种层析技术原理及特点。

（02）1.凝胶过滤层析根据大小和形状分离，这种分离方式是非吸附性的，整个分离过程中只需要一种缓冲液，实验操作方便。在峰谱图中，出峰顺序是：大分子先流出层析柱，小分子后出。

（03）2.离子交换层析不同蛋白质的等电点（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH缓冲液条件下所带正/负净电荷不同，选择不同的离子交换柱实现分离。离子交换层析属于吸附性分离方式，纯化过程中它具有可逆、操控性强及实现样品浓缩等特点。在精纯实验中是常与其它方法相结合使用的主要技术。

（04）3.亲和层析通过生物分子之间的特异性相互作用来实现分离的层析方法。亲和层析具有高选择性、高纯度、快速、浓缩等特点，在重组蛋白的分离中多作为第一步的粗纯，实现对绝大部分杂质蛋白的去除。

（05）4.疏水相互作用层析依据生物分子间疏水性差别实现分离的一种层析方式。高离子强度下，增进蛋白质中的疏水性氨基酸与层析介质间的疏水性相互作用，削弱其静电作用力。洗脱时，降低流动相离子强度，削弱蛋白质分子与层析介质间的疏水作用，实现目的蛋白的纯化和收集。

（06）疏水作用层析也属于吸附性分离方式，对具有疏水特性的目的蛋白具有高选择性和浓缩等特点。

特别提示

更多的详细介绍如何运用各种层析技术实现不同蛋白的分离纯化知识，敬请期待